В.П. Герасименя, Т.И. Милевич, А.Д. Наумов, С.В. Захаров, В.Ю. Поляков, Г.И. Кирьянов, К.З. Гумаргалиева, Л.А. Путырский, Ю.Л. Путырский, М.М. Сачек

ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ЭКСТРАКТА МИЦЕЛИЯ ГРИБА «ВЕШЕНКА ОБЫКНОВЕННАЯ»

000«Инбиофарм» Москва, Россия; НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского, Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова, Институт химической физики им. Н.Н. Семенова, Россия, Институт радиобиологии НАН Беларуси, РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова Республики Беларусь, РНПЦ медицинских технологий, информатизации управления и экономики здравоохранения Минздрава Республика Беларусь.
Приведены результаты экспериментальных (доклинических) исследований противоопухолевой активности экстракта мицелия гриба «Вешенка обыкновенная» и его способности потенцировать антибластомное действие цитостатических препаратов invitro и invivo.
На основе полученных данных разработана и зарегистрирована в Российской Федерации и Республике Беларусь биологически активная добавка к пище «Экстракт мицелия вешенки «Оводорин» (в виде геля и сиропа), применение которого в реабилитационный период может существенно повысить защитные силы организма и качество жизни онкологических больных. Компания ООО «Инбиофарм» занимается разработкой инновационного детоксикационного медицинского препарата для коррекции лекарственной непереносимости в комплексном лечении онкологических заболеваний и в реабилитационный период.
Ключевые слова: биологически активная добавка, экстракт мицелия вешенки, онкологические заболевания.
Общеизвестно, что заболеваемость и смертность населения России и Республики Беларусь в последние годы существенно увеличились. В настоящее время ежечасно заболеваемость возрастает в среднем до 75 новых онкологических больных.
Ведущую роль в лечении онкологических заболеваний, играют химически синтезированные препараты. Для лечения рака широко применяются цитостатики (например: циклофосфан, доксорубицин, метотрексат, 5-фторурацил, таксаны и др.) [1]. Между тем, нужно сознавать, что применение этих препаратов вызывает серьезные побочные действия на организм человека (астения, диспепсия, панкреатит, нарушение функций печени, и др.).
Анализ опыта работы по совершенствованию национальной лекарственной политики с учетом рекомендаций ВОЗ показывает, что в дополнение к современным химически синтезированным препаратам, а в перспективе, возможно и на смену, должны прийти препараты из природного материала с различными биологически активными веществами, которые мягко воздействуют на организм в целом и корригируют измененные функции организма без побочных, отрицательных эффектов, при этом существенно повышают общую сопротивляемость [2].
В народной медицине давно известны целительные возможности грибов (фунготерапия, наука о лечении грибами, зародилась в III веке до н. э.). В медицинской практике базидиальные грибы используют более 2000 лет, они являются источником биологически активных веществ с противоопухолевой, антимикробной, иммуномодулирующей и другой специфической медико-биологической активностью [3-5]. К базидиомицетам относятся примерно 10 000 видов грибов из 550 родов 80 семейств. Однако, в настоящее время известно примерно 200 видов базидиальных грибов медицинского назначения. Вместе с тем, в этих грибах большинство из действующих веществ не идентифицировано.
Несмотря на относительно большое число установленных лечебных эффектов базидиомицетов, только порядка 10 видов так называемых медицинских грибов используют для получения лекарственных средств и биологически активных добавок (БАД) к пище.
Как в Российской Федерации, так и в Республике Беларусь на фармацевтическом рынке отечественных препаратов на основе биологически активных веществ медицинских грибов практически нет. Сдерживающим фактором практического применения медицинских грибов являлась трудоемкая и сложная работа по выделению из них чистых веществ (ферментов, антибиотиков, противоопухолевых веществ и др.) [6-12].
Значительные исследования в области изучения биологически активных веществ медицинских грибов были проведены в 60-е и 70-е годы учеными СССР. Однако широкого внедрения эти результаты исследований не получили в основном из-за отсутствия надежной технологии и базы выращивания культур медицинских грибов, получения экстрактов и выделения из них компонентов с заданными медико-биологическими свойствами. Одним из главных стратегических направлений компании является поиск, разработка и создание нового поколения лекарственных препаратов и БАД к пище на основе природного растительного сырья [6].
Начиная с 1997 года внимание ученых фармацевтической компании «Инбиофарм» было обращено на исследование гриба «Вешенка обыкновенная», произрастающего на территории России. В результате многолетнего труда группе ученых во главе с Заслуженным деятелем науки РФ, доктором технических наук, профессором Герасименей В.П. удалось выделить экстракт из мицелия гриба «Вешенка обыкновенная», выращенного в условиях искусственного культивирования с использованием принципиально новых технологий [15, 19]. Результатом плодотворной работы за это время явились зарегистрированные 7 форм БАД к пище «Экстракт мицелия вешенки» в виде геля, спиртового раствора и сиропа.
В 2008 году Роспотребнадзором, а в 2010 году в Республике Беларусь две новые формы БАД к пище «Экстракт мицелия вешенки «Оводорин»:
- сгущенный экстракта (гель), в виде вязкого однородного концентрата (Свидетельство о гос. регистрации 77.99.23.3.У.11397.12.09 от 14.12.2009 г. по ТУ 9317-01-87552538-08; Удостоверение о государственной гигиенической регистрации в РБ 06-33-0.586427 от 03.06.2010г.);
- сироп, содержащий в том числе глюкозамин (Свидетельство о гос. регистрации № 77.99.23.3.У.11398.12.09 от 14.12.2009 г по ТУ 9317-02-87552538-08; Удостоверение о государственной гигиенической регистрации в РБ 08-33-0.386425 от 03.06.2010г.).
Нельзя не сказать об уникальном производстве препаратов, получаемых из мицелия вешенки что во многом определяет его полезные свойства экстракта.
Технологический процесс производства экстракта мицелия вешенки включает три этапа [13-18]:
– выращивание биомассы мицелия: селекционные работы со штаммом; приготовление посевного материала (на агаризованной среде); глубинное культивирование мицелия (выращивание на жидких средах и отделение мицелия от культуральной жидкости);
– преобразование сгущенного экстракта в гель: экстракция, фильтрация и упаривание (в вакууме);
– приготовление сиропа: подготовка экстракта и сиропа фруктозы, смешивание этих компонентов.
БАД к пище «Экстракт мицелия вешенки «Оводорин» (гель), производимая в форме сгущенного экстракта, представляет собой выпаренный экстракт из мицелия вешенки (штамм 1137, ВКПМ F-819), выращенного в регулируемых асептических условиях методом глубинного культивирования на жидкой питательной среде, содержащей растительное сырье [17].
БАД к пище “Экстракт мицелия вешенки «Оводорин» (сироп), представляет собой смесь выпаренного сгущенного экстракта мицелия вешенки (штамм 1137, ВКПМ F-819), выращенного в регулируемых асептических условиях методом глубинного культивирования на жидкой питательной среде, и сиропа фруктозы, изготовленного из смеси фруктозы, лимонной кислоты, бензоата натрия, дигидрокверцетина и воды [18].
Экстракт мицелия вешенки включает:
- углеводы (глюкоза, галактоза, манноза, арабиноза, ксилоза, галактозам, глюкозамин);
- аминокислоты (аспаргин, серин, треонин, глютамин, пролин, глицин, аланин, валин, лейцин, лизин, гистидин, аргинин, цистин, метионин, тирозин, фенилаланин);
- жирные кислоты (С10 - С22);
- органические кислоты (масляная, молочная, уксусная, яблочная, щавелевая);
- витамины (В1, В2, В3, В6, РР, D, E, С);
- металлы и микроэлементы (натрий, калий, кальций, магний, фосфор, сера, железо, цинк, марганец, селен, медь, алюминий, бор, барий, кремний, литий и др.);
- воду.
Всего в составе геля определено более 75 полезных для организма биологически активных веществ, находящихся в природных, естественных соотношениях, что и определяет высокую биологическую активность препарата.
Дополнительно в состав биологически активных веществ экстракта введен один из самых активных природных флавоноидных антиоксидантов (дигидрокверцетин), за счет чего сироп обладает выраженной антиоксидантной активностью.
Экстракт мицелия вешенки активен в отношении как грамположительных бактерий, в том числе метициллинрезистентных (MRSA) и метициллинчувствительных (MSSA) бактерий {Bacillus subtilis АТСС 6633, В. mycoides 537, B.pumilis NCTC 8241, Leuconostoc mesenteroides VKPM B- 4177, Micrococcus luteus NCTC 8340, Staphylococcus aureus FDA 209P (MSSA), INA 00761 (MRSA), INA 00762 (MSSA)}, так и грамотрицательных бактерий {Escherichia coli АТСС 25922, Comamonas terrigena АТСС 8461, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853} [19, 20].
За эти годы проведен целый комплекс медико-биологических и клинических испытаний разрабатываемых и созданных препаратов на основе биологически активных веществ экстракта мицелия вешенки и получены убедительные, положительные результаты их медико-биологической эффективности [21-28]. При профилактике и лечении ряда заболеваний не выявлено побочных действий. Сочетанное применение экстрактов с другими существующими фармацевтическими препаратами способствует устранению побочных эффектов последних и усиливает их синергетическое действие.
В качестве объекта для проверки цитотоксичности экстракта мицелия вешенки использовали перевиваемые клетки почки зеленой мартышки (Vero). Клетки этой культуры не являются раковыми и их разрешено использовать для приготовления вакцин. БАД «Экстракт мицелия вешенки» в различных концентрациях (5000, 2500, 1000, 500 и 100 мкг/мл) вносили в среду культивирования клеток Vero. Проведенные исследования показали, что в течение 7 дней наблюдений в концентрациях 1000, 500 и 100 мкг/мл экстракт не вызывал видимых цитопатических изменений как монослоя, так и индивидуальных клеток Vero.Четко тестируемые изменения морфологии у 50% клеток происходят при концентрации БАД «Экстракт мицелия вешенки» 2500 мкг/мл. Таким образом, ЛД50 для данной культуры клеток составляет 2500 мкг/мл.
Определение доли делящихся клеток (митотического индекса) в контрольных клетках HeLa и клетках, обработанных БАД «Экстракт мицелия вешенки», показывает, что экстракт в концентрации 50 мкг/мл и 100 мкг/мл незначительно увеличивает митотический индекс через 24 часа обработки за счет возрастания доли патологических митозов.
Появление характерных хромосомных аберраций типа «мост» в клетках, обработанных экстрактом, свидетельствует о том, что одной из возможных мишеней его действия является ДНК.
В условиях однократного введения экстракта мицелия вешенки в среду культивирования он практически не является индуктором апоптоза.
После 3 дней культивирования в среду добавляли экстракт в концентрации 50 мкг/мл на 8 часов, а затем экстракт в концентрации 100 мкг/мл. После повторного введения БАД «Экстракт мицелия вешенки» клетки инкубировали 16 час.
Полученные результаты показывают, что использованный протокол воздействия повышает долю апоптических клеток в популяции примерно в 15 раз.
Ярко выраженное действие на пролиферацию клеток экстракт проявляет при сочетанном использовании с цитостатиками (циклофосфан, доксорубицин и метатрексат).
При использовании БАД «Экстракт мицелия вешенки» в дозе 50 мкг/мл и циклофосфана 300 мкг/мл не отмечалось подавления пролиферации, однако при повышении концентрации БАД до 100 мкг/мл наблюдалось обратное.
На основании клинических рекомендаций, в пересчете на 1 мл среды культивирования использовали цитостатики в следующих дозах: доксорубицин - 0,01 мкг/мл, метотрексат – 4 мкг/мл, 5-фторурацил – 20мкг/мл. При сочетанном действии экстракта мицелия вешенки и цитостатиков в указанных выше дозах наблюдается полное ингибирование митозов.
Анализ показал, что для индукции апоптоза наиболее эффективна предварительная обработка клеток экстрактом мицелия вешенки (1 час) с последующим введением цитостатиков (7 ч). При этом эффективность действия БАД существенно зависит от типа цитостатика.
Циклофосфан. Инкубация клеток с экстрактом (50 и 100 мкг/мл, 1 час обработки) и последующее добавление циклофосфана (300 мкг/мл, 8 часов совместного действия) резко стимулирует апоптоз (количество апоптических клеток в этих условиях возрастает примерно в 5 – 6 раз по сравнению с контролем).
Доксорубицин. При сочетанном действии с БАД «Экстракт мицелия вешенки» доля апоптических клеток повышается в 1,5 - 2 раза по сравнению с использованием только доксорубицина. Это означает, что по сравнению с контролем количество клеток, включивших программу апоптоза, возрастает примерно в 25 раз.
Метатрексат. При сочетанном действии с БАД «Экстракт мицелия вешенки» метатрексат примерно в 4 раза повышает долю апоптических клеток по сравнению с его индивидуальным использованием.
На основании проведенных экспериментов можно предположить, что БАД «Экстракт мицелия вешенки» детерминирует переход клеток в «предапоптическое состояние». В таком случае, последующая обработка цитостатиками приводит к включению программы апоптоза.
Также провели исследования индивидуального и сочетанного действия БАД, доксорубицина и циклофосфана на клетки суспензионной культуры человеческого миелоидного лейкоза. Клетки инкубировали 1 час в присутствии экстракта мицелия вешенки (100 мкг/мл), после чего добавляли в среду культивирования доксорубицин (0,0002 мкг/мл), циклофосфан (300 мкг/мл) и инкубировали клетки в течение 8 и 24 часов. В качестве контроля клетки инкубировали в присутствии БАД «Экстракт мицелия вешенки» и доксорубицина в тех же концентрациях.
Полученные данные показали, что при раздельном воздействии БАД «Экстракт мицелия вешенки» и доксорубицин незначительно повышают количество апоптических клеток (до 6 и 12%, соответственно). Циклофосфан не вызывает увеличения количества апоптических клеток по сравнению с контролем.
Использование смеси реагентов в течение 8 час значительно эффективнее индуцирует апоптоз в лейкозных клетках (27%). Более сильная стимуляция апоптоза наблюдается, если клетки в смеси реагентов инкубировать 24 часа. При такой постановке эксперимента в апоптоз вступают около 70% клеток исследуемой популяции.
Таким образом, сочетанное действие БАД «Экстракт мицелия вешенки», доксорубицина и циклофосфана, после дополнительных исследований, может быть использовано для терапии некоторых форм лейкозов. Важно, что концентрация доксорубицина, использованная в данных экспериментах, намного ниже дозы, рекомендованной для медицинского применения.
Раздельное или сочетанное действие на нормальные фибробласты человека циклофосфана и БАД «Экстракт мицелия вешенки» не приводит к индукции апоптической гибели клеток.
Сочетанная обработка по протоколу, предусматривающему предварительную инкубацию клеток с циклофосфаном в дозе 300 мкг/мл (1час), а затем добавление экстракта в дозах 50 или 100 мкг/мл и инкубацию до 8 час, приводит к повышению числа клеток, вступающих в деление. Количественный анализ показал, что митотический индекс возрастает примерно в 3 раза. Количество апоптических клеток при этом не изменяется по сравнению с контролем.
Сочетанная обработка по протоколу, предусматривающему предварительную инкубацию клеток с БАД «Экстракт мицелия вешенки» в дозе 50 мкг/мл (1 час), а затем добавление циклофосфана в дозе 300 мкг/мл (1час) и инкубацию до 8 час, приводит к более значительному повышению числа клеток, вступивших в деление. Количественный анализ показал, что митотический индекс при этом возрастает примерно в 4 – 5 раз, а число апоптических клеток уменьшается примерно в 3 раза. Одновременное введение циклофосфана и БАД «Экстракт мицелия вешенки» практически не влияет на пролиферацию.
На основании проведенных исследований можно сделать предварительное заключение о том, что клеточный ответ трансформированных и нормальных клеток на индивидуальное и сочетанное действие экстракта мицелия вешенки и циклофосфана принципиально различается. В трансформированных клетках эти реагенты при определенном соотношении и методе введения способны индуцировать апоптическую гибель клеток, тогда как их действие на нормальные клетки ограничивается эффектом, показывающим только возрастание доли делящихся клеток.
Опыты по выявлению противоопухолевой активности БАД показали, что экстракт мицелия вешенки, введенный мышам в лечебном режиме с использованием моделей карциномы Эрлиха, лимфоидной лейкемии L 1210, противоопухолевой активности не проявлял и не оказывал влияния на химиотерапевтическую эффективность доксорубицина, метотрексата, циклофосфана.
При предварительном введении экстракта вешенки до имплантации мышам клеток карциномы Эрлиха и применения циклофосфана наблюдалось достоверное увеличение средней продолжительности жизни мышей-опухоленосителей на 36% (p<0,001). В то же время циклофосфан обусловил увеличение средней продолжительности жизни мышей на 28% (p<0,02). Эти результаты свидетельствуют о повышении химиотерапевтической эффективности циклофосфана в случае предварительного введения экстракта вешенки.
При сочетанном лечебно - профилактическом использовании препарата (5 сут предварительного + 5 сут повторного введения после имплантации карциномы Эрлиха) получили достоверные результаты по повышению химиотерапевтической эффективности циклофосфана, о чем свидетельствовало увеличение средней продолжительности жизни мышей по сравнению с животными контрольной группы на 58% (p<0,001).
Влияние БАД «Экстракт мицелия вешенки» и циклофосфана на FP-экспрессирующие модельные опухоли мышей оценивали по следующим параметрам:
- масса тела животных на протяжении 24 суток (ежедневно);
- изменение площади опухоли после введения БАД и циклофосфана на протяжении 21 суток;
- количество лейкоцитов в периферической крови (0-е, 1-е, 3-е и 7-есутки) после начала эксперимента);
- флуоресцентные изображения опухоли на протяжении 21 сут (каждые 2 сут).
Исследования проводили на мышах С57 BL/6, самцах (возраст 6 нед, вес 23 - 30 г.). В 1-й группе мышей животным вводили циклофосфан (300 мг/кг) совместно с БАД (100 мг/кг), во 2-й только циклофосфан (300 мг/кг), в 3-й - только БАД (100 мг/кг), 4-я группа - интактный контроль (мыши с первичной опухолью).
При этом циклофосфан мышам вводился однократно после 5-ти суток перепривитой опухоли, а БАД - ежедневно на протяжении первых 10 сут.
Исследуемая опухоль - мышиная меланома В16 - GFP.
Регистрацию флуоресцентных изображений проводили в закрытом темном ящике. Животных облучали с помощью 2 световодных жгутов от лампового источника света с интерференционным фильтром, пропускающим свет с длиной волны 470 нм. Флуоресценцию регистрировала охлаждаемая камера «Hamamatsu С5810» через фильтр (GG475), отсекающий излучение возбуждения. Флуоресцентные изображения 1024 х 724 пикселей обрабатывались и анализировали и анализировали с использованием IMAGE PRO PLUS 3.1.
Анализ полученных данных серии опытов позволил сделать вывод о том, что применение экстракта мицелия вешенки снижает выраженность и продолжительность лейкопении, вызванные введением животным циклофосфана в дозе 300 мг/кг (ЛД25).
Судя по полученным значениям массы тела - мышей, площади опухоли и флуоресцентных изображений новообразования, совместное применение циклофосфана с БАД «Экстракт мицелия вешенки» резко снижает развитие меланомы В16 - GFP у животных. Следует отметить то, что применяемый БАД без циклофосфана также тормозит рост опухоли в исследуемой группе мышей, что подтверждает полученные нами ранее результаты по противоопухолевой активности экстракта относительно угнетения рака молочной железы Эрлиха.
Метастазирование солидных опухолей - один из ключевых признаков ее злокачественности. Появление метастазов на ранних этапах  лимитирует эффективность всех известных способов лечения опухоли (хирургическое удаление, химио- и лучевая терапии и др.), применяемых в онкологии.
Эксперименты проводили на мышах самках F1 (СВА х C57Bl/6) массой 20 - 22 грамма. Спонтанно метастазирующую карциному легкого Льюис (LLC) трансплантировали в мышцу бедра задней лапы экспериментальных животных. БАД «Экстракт мицелия вешенки» вводили внутрижелудочно в дозе 50 и 100 мг/кг массы тела, начиная со 2-х суток после трансплантации опухоли, введение прекращали за сутки до окончания эксперимента. Циклофосфан вводили внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг трехкратно 1 раз в неделю, начиная с 5 суток после трансплантации опухоли, в дозе 300 мг/кг однократно на 5 сутки после трансплантации опухоли, через 2 часа начинали введение БАД в дозе 100 мг/кг. На 14 сутки фиксировали размер опухоли, определяя средний ее диаметр. Животных забивали на 23 сутки после трансплантации опухоли, измеряли массу животных и опухоли, легкие взвешивали и фиксировали в растворе Боуэна.
Полученные результаты оценивали по следующим параметрам: масса опухоли а также легких с метастазами; количество метастатических узлов в легких; относительное изменение массы тела экспериментальных животных; биохимические показатели крови; клеточный состав крови (лейкоциты, эритроциты, тромбоциты).
Биохимический анализ сыворотки крови выполняли на анализаторе "KONE Ultra" (Финляндия), используя стандартные тест-наборы реактивов фирмы "DiaSys" (Германия) - для определения активности трансаминаз АлТ и АсТ, фирмы "BioSystems" (Испания) - для определения активности щелочной фосфатазы (ЩФ) и фирмы "Chronolab" (Швейцария) - для определения содержания общего билирубина.
Анализ полученных результатов серии опытов позволил сделать вывод о том, что БАД «Экстракт мицелия вешенки» в дозе 100 мг/кг ингибировал интенсивность метастазирования (по числу метастазов в легких) и массу метастатических узлов. В комбинации с циклофосфаном (100мг/кг) повышал эффективность антиметастатического действия цитостатика, увеличивая уровень торможения метастазирования с 69% до 94%. При введении высоких доз циклофосфана (300 мг/кг) БАД «Экстракт мицелия вешенки» в дозе 100 мг/кг наглядно демонстрировал способность снижать токсические эффекты цитостатика, увеличивая продолжительность жизни животных в условиях проводимого эксперимента более чем на 180%.
Таким образом, в результате проведенных экспериментальных (доклинических) исследований получены результаты, подтверждающие противоопухолевую активность экстракта мицелия гриба «Вешенка обыкновенная» и его способность потенцировать антибластомное действие цитостатических препаратов in vitro и in vivo.
Экстракт мицелия вешенки проявляет выраженные антитоксические свойства при влиянии на опухолевую кахексию, снижая потерю массы тела и нормализуя биохимические показатели крови. При сочетанном применении экстракта с цитостатиками выявлено ингибирующее  влияние как самого экстракта на развитие метастазирующего процесса опухоли в организме, так и повышение антиметастазного эффекта известных цитостатиков.
Учитывая медико-биологические свойства экстракта мицелия вешенки, можно рекомендовать разработанные и производимые БАД к пище «Экстракт мицелия вешенки «Оводорин» в виде геля и сиропа для применения у онкологических больных в реабилитационный период, что позволит существенно повысить защитные силы организма человека и качество жизни больных.
В медицинской практике сегодня отсутствуют средства «сопровождения» химиотерапии (так называемые адаптогены). Полученные результаты экспериментальных (доклинических) исследований экстракта мицелия гриба «Вешенка обыкновенная» положены компанией ООО «Инбиофарм» (г. Москва) в основу разработки инновационного детоксикационного медицинского препарата для коррекции лекарственной непереносимости в ходе комплексного лечения онкологических заболеваний и в реабилитационный период.

Список литературы

      1. Корман Д. Б. Основы противоопухолевой химиотерапии. - М., 2006.
      2. Комбинированное и комплексное лечение рака легкого, молочной железы, пищевода и прямой кишки в условиях применения растительных адаптогенов и лазерного облучения крови: Методич. рекомендации. - Министерство здравоохранения и медицинской промышленности РФ. - СПб., 1996.
      3. Borchers AT, Stern JS, Hackman RM, at.al.// Proc. Soc. Exp. Biol. Med. – 1999. - Vol. 221, №4. - P. 281-293.
      4. Wasser SP. // Appl. Microbiol. Biotechnol. – 2002. - Vol. 60, №3. – P. 58-74.
      5. Xie JT, Wang CZ, Wicks S, at.al. // Exp. Oncol. – 2006. – Vol. 28, №1. – P. 25-29.
      6. Герасименя В.П. Состояние и перспективы использования в медицине биологически активных веществ базидиальных грибов, модулирующих в организме проявление гематолгической токсичности противоопухолевых препаратов и коррекции пострадиационных нарушений (обзор литературы). - М. 2002.
      7. Анофелес С. // Журнал Химия и жизнь - XXI век. -2010. - №8. – С. 30-35.
      8. Fullerton SA, Samadi AA, Tortorelis DG, at.al. // Mol.Urol. - 2000. Vol. 4, №1. – P. 7-13.
      9. Harada T, Masuda S, Arii M at.al. // Biol. Pharm. Bull. – 2005. – Vol. 28, № 12. – P. 2342-2345.
      10. Bobek P, Galbavy S, Ozdin L. // Oncol. Rep. – 1998. – Vol. 5, № 3. – P. 727-730.
      11. Sarangi I, Ghosh D, Bhutia SK, at.al. // Int. Immunopharmacol. – 2006.Vol. 6, №8. – P. 1287-1297.
      12. Shlyakhovenko V, Kosak V, Olishevsky S. // Exp Oncol. – 2006. – Vol. 28, №2. – P. 132-135.
      13. Герасименя В.П., Орлов А.Е. и др. Патент РФ «Препарат, влияющий на тканевый обмен, и применение штамма гриба P. Ostreatus 1137 для его получения» № 2192873. от 20.11.2002. Бюл. № 32.
      14. Отчет о НИР. Биосинтез антитоксических веществ штаммомPleurotusostereatus (Fr.) Kumm.1137. (Шифр «ОВО-Д – 2002»). - М., 2002.
      15. Технологическая инструкция по производству БАД к пище «Экстракт мицелия вешенки Оводорин» (к ТУ 9317-01-87552538-08). - М., 2008.
      16. Технологическая инструкция по производству БАД к пище «Экстракт мицелия вешенки Оводорин» (сироп) (к ТУ 9317-02-87552538-08).  - М., 2008.
      17. Технические условия ТУ 9317-01-87552538-08). Биологически активная добавка к пище «Экстракт мицелия вешенки Оводорин». - М., 2008.
      18. Технические условия  ТУ 9317-02-87552538-08). Биологически активная добавка к пище «Экстракт мицелия вешенки Оводорин» (сироп). - М., 2008.
      19. V.P.Gerasimenya. // Int. J. of Med. Mushrooms. – 2002. - Vol. 4. - Р. 127-132.
      20. Конопля Е.Ф., Милевич Т.И., Герасименя В.П. и др.// Becцi HAH Беларусi. Сер. мед.-бiял. навук. - 2002. - № 3. - С. 92-96.
      21. Конопля Е.Ф., Милевич Т.И., Путырский Л.А. и др. // Новые лекарственные средства: синтез, технология, фармакология, клиника: Тез. докл. Междунар. науч. конф. - Минск, 2001. - С. 73-74.
      22. Милевич Т.И., Конопля Е.Ф., Машкович А.Е. и др. // Актуальные проблемы онкологии и медицинской радиологии: Сб. науч. работ. – Минск, 2002. - С. 509-514.
      23. Шаповалова Л.М., Орлов А.Е., Герасименя В.П. и др. Исследование противоопухолевых, антиметастатических и антитоксических свойств БАД «ОВО-Д». Тез. Докл. XII Российского национального конгресса «Человек и лекарство» - 2005.
      24. Миерович И.Г., Герасименя В.П., Орлов А.Е. и др. // Рос. Биотерапевтич. журнал. – 2005. - Т4, № 3. - С. 95-100.
      25. Орлов А.Е., Герасименя В.П., Трезвова А.В. и др. // Практическая фитотерапия. - М., 2007. - Т.2. - С. 30-38.
      26. Поляков В.Ю., Кирьянов Г. И., Герасименя В.П. и др. // Биологич. мембраны. - 2007. – Том 24, №5. - С. 379-388.
      27. Шаповалова Л.М. // PRO здоровье. - 2008. - № 3 (38). - С. 30-31.
      28. Герасименя В.П., Захаров С.В., Путырский Л.А. и др. Противоопухолевое действие экстракта мицелия вешенки. Экспериментальные и клинические исследования. - М., 2009.