ДЕЙСТВИЕ ИНЦИСТЕРОЛА НА ЦИТОКИНЕТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК

В.Ю. Поляков,  Л.Н. Кинцурашвили,  М.И.Мурашова, *С.В. Захаров,  *В.П. Герасименя,  Г.И. Кирьянов

 Научно-исследовательский институт физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского  Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, Москва,   Россия;

*ООО «Инбиофарм», Москва, Россия.

 Для оценки индивидуального действия инцистерола (4-hydroxy -17R–methylincisterol)в среду культивирования (10 мл среды) добавляли по 100 мкл раствора инцистерола в этаноле в концентрации  10, 25, 50, 100, 200 и 500 мкг/мл. Таким образом, конечная концентрация инцистерола в культуральной среде составляла 0,1, 0,25, 0,5, 1,0, 2,0 и 5,0 мкг на мл среды. В качестве контроля использовали интактные клетки и клетки, инкубируемые в среде с добавлением 1% этанола, что соответствует содержанию этанола во всех остальных точках.
Контрольные и экспериментальные клетки инкубировали с препаратом в течение 8 часов, фиксировали параформальдегидом, окрашивали гематоксилином или флуорохромом Хехст и заключали в Мовиол по стандартной методике. Подсчет количества делящихся и апоптотических клеток проводили в микроскопе. В каждом препарате было проанализировано не менее 3000 клеток.
Полученные данные суммированы на рисунке 1.



Рисунок 1 - Действие инцистерола на пролиферацию и индукцию апоптоза в популяции  трансформированных клеток HeLa.


Цифры 1 - 7 по оси «х» - данные для концентраций инцистерола в культуральной среде мкг/мл: - 0; 0,1; 0,25; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 мкг/мл соответственно. На оси «у» - доля клеток (митотических и апоптотических) в процентах.
В популяции контрольных клеток HeLa (рисунок 1), наряду с активно пролиферирующими клетками, всегда присутствуют апоптотические клетки, количество которых может незначительно меняться в зависимости от штамма и времени культивирования   (рисунок 2).
В условиях эксперимента, через 8 часов после инсталляции препарата, доля пролиферирующих и апоптотических клеток существенно не изменяется при концентрациях инцистерола от 0,1 до 1,0 мкг/мл (рисунок 1). В концентрации 2,0 мкг/мл препарат не влияет на пролиферацию, тогда как доля апоптотических клеток возрастает примерно в 3,5 раза по сравнению с контролем (рисунок 1). При концентрации инцистерола 5,0 мкг/мл доля делящихся клеток уменьшается примерно в 4 раза и одновременно резко (примерно в 20 раз) возрастает количество клеток, включивших программу апоптотической гибели (рисунки 1, 3).


Рисунок 2 - Популяция контрольных клеток HeLa.


Рисунок 3 - Популяция   клеток HeLa в условиях эксперимента, через 8 часов после инсталляции препарата в дозе 5,0 мкг/мл.